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          軍團菌檢測設備

          軍團菌檢測設備
              軍團菌及軍團菌?。?/strong>軍團病系1976年在費城美國退伍軍人年會中首次發現的急性發熱性肺部疾患而被命名的.軍團菌是引起軍團病的病原菌,廣泛存在于自然界及建筑給水系統中,特別是封閉式的公共場所.如地鐵、火車站、辦公環境、醫院、影劇院、賓館等,城市的大型建筑物中通常配備有中央空調系統、冷熱水管道以及加濕器,軍團菌常常以氣溶膠方式感染人群.軍團菌是近20年來新發現的傳染病之一。
          哪些地方要檢測軍團菌:集中空調通風系統、循環冷卻水、冷凝水、沐浴用水、飲用水等。
           
          軍團菌檢測設備包括哪些儀器設備試劑耗材?
          軍團菌檢測設備包括軍團菌檢測儀器和設備以及軍團菌培養基、軍團菌生化鑒定套裝、軍團菌診斷血清等產品。
          軍團菌檢測設備在WS 394-2012 公共場所集中空調通風系統衛生規范附錄B中有詳細說明。
           
          WS 394-2012 公共場所集中空調通風系統衛生規范
          附 錄B(規范性附錄)集中空調系統冷卻水、冷凝水中嗜肺軍團菌檢驗方法
          11.1 B.1 總則
          本附錄規定了用培養法定性測定集中空調系統冷卻水、冷凝水及其形成的沉積物、軟泥等樣品中的嗜肺軍團菌,其他洗浴水、溫泉水、景觀水等樣品中的嗜肺軍團菌測定可參照執行。
          11.2 B.2 術語和定義
          下列術語和定義適用于本方法。
          B.2.1
          嗜肺軍團菌  legionella pneumophila
          樣品經培養在GVPC瓊脂平板上生成典型菌落,并在BCYE瓊脂平板上生長而在L-半光氨酸缺失的BCYE瓊脂平板不生長,進一步經生化實驗和血清學實驗鑒定確認的菌落。
          11.3 B.3 儀器和設備
          B.3.1 平皿:Φ90 mm。
          B.3.2  CO2培養箱:35℃~37℃。
          B.3.3 紫外燈:波長360 nm±2 nm。
          B.3.4 濾膜過濾器。
          B.3.5 無菌濾膜:孔徑0. 22 μm~0. 45 μm。
          B.3.6 真空泵。
          B.3.7 離心機。
          B.3.8 渦旋振蕩器。
          B.3.9 普通光學顯微鏡、熒光顯微鏡。
          B.3. 10 水浴箱。
          B.3. 11  廣口采樣瓶:玻璃或聚乙烯材料,磨口,容積500 mL。
           
          11.4 B.4 培養基和試劑
          B.4,1  GVPC瓊脂平板。
          B.4.2  BCYE瓊脂平板。
          B.4.3 BCYE-CYE瓊脂平板。
          B.4.4 革蘭氏染色液。
          B.4.5 馬尿酸鹽生化反應管(軍團菌生化鑒定套裝)。
          B.4.6 軍團菌分型血清試劑。
           
          11.5 B.5 采樣
          B.5.1 將廣口采樣瓶(B.3.11)用前滅菌。
          B.5.2  每瓶中加入Na2S203溶液(c=0.1 mol/L)O.3 ml_~0.5 mL,中和樣品中的氧化物。
          B.5.3 水樣采集位置:冷卻水采樣點設置在距塔壁20 cm、液面下10 cm處,冷凝水采樣點設置在排水管或冷凝水盤處。
          B.5.4 每個采樣點依無菌操作取水樣約500 mL。
          B.5.5 采集的樣品2d內送達實驗室,不必冷凍,但要避光和防止受熱,室溫下貯存不得超過15 d。
          11.6 B.6 檢驗步驟
          B.6.1  樣品的沉淀或離心:如有雜質可靜置沉淀或1000 r/min離心1 min去除。
          B.6.2 樣品的過濾:將經沉淀或離心的樣品通過濾膜(B.3.5)過濾,取下濾膜置于15 mL滅菌水中,充分洗脫,備用。
           
          B.6.3 樣品的熱處理:取1 mL洗脫樣品,置50℃水?。˙.3.10)加熱30 min。
          B.6.4 樣品的酸處理:取5 mL洗脫樣品,調pH至2.2,輕輕搖勻,放置5 mm。
          B.6.5 樣品的接種:取洗脫樣品(B.6.2)、熱處理樣品(B.6.3)及酸處理樣品(B.6.4)各0. 1 mL,分別接種GVPC平板(B.4.1)。
          B.6.6  樣品的培養:將接種平板靜置于CO2培蕎箱(B.3.2)中,溫度為35℃-37℃,CO:濃度為2. 5%。無CO2培養箱可采用燭缸培養法。觀察到有培養物生成時,反轉平板,孵育10 d,注意保濕。
          B.6.7 菌落觀察:軍團菌生長緩慢,易被其他菌掩蓋,從孵育第3天開始每天在顯微鏡(B.3.9)上觀察。軍團菌的菌落顏色多樣,通常呈白色、灰色、藍色或紫色,也能顯深褐色、灰綠色、深紅色;菌落整齊,表面光滑,呈典型毛玻璃狀,在紫外燈下,部分菌落有熒光。
           
          B.6.8 菌落驗證:從平皿上挑取2個可疑菌落,接種BCYE瓊脂平板(B.4.2)和L-半光氨酸缺失的BCYE瓊脂平板(B.4.3),35℃~37℃培養2 d,凡在BCYE瓊脂平板上生長而在L一半光氨酸缺失的BCYE瓊脂平板不生長的則為軍團菌菌落。
          B.6.9 菌型確定:應進行生化培養與血清學實驗確定嗜肺軍團菌。
          生化培養:氧化酶(-/弱+),硝酸鹽還原(-),尿素酶(-),明膠液化(+).水解馬尿酸。血清學實驗:用嗜肺軍團菌診斷血清進行分型。
           
          附錄G(規范性附錄)集中空調送風中嗜肺軍團菌檢驗方法
          16.1 G.1 總則
          本附錄規定了用液體沖擊法測定集中空調系統送風中的嗜肺軍團菌。
          16.2 G.2 術語和定義
          下列術語和定義適用于本方法。
          G.2.1
          嗜肺軍團菌  legionella pneumophila
          樣品經培養在GVPG瓊脂平板上生成典型菌落,并在BCYE瓊脂平板上生長而在L-半光氨酸缺失的BCYE瓊脂平板不生長,進一步經生化實驗和血清學實驗鑒定確認的菌落。
          16.3 G.3 儀器和設備
          G.3.1  微生物氣溶膠濃縮器:采樣流量≥100 L/min.,對于直徑3.0μm以上粒子其捕集效率≥80%或濃縮比≥8。
          G.3.2 液體沖擊式微生物氣溶膠采樣器:采樣流量7 L/min-15 L/min.,對于0.5μm粒子的捕集效率≥90%。
          G.3.3 離心管:容積50 mL。
          G.3.4 平皿:Φ90 mm。
          G.3.5  CO2培養箱:35℃~37℃。
          G.3.6  紫外燈:波長360 nm±2 nm。
          G.3.7  渦旋振蕩器。
          G.3.8 普通光學顯微鏡、熒光顯微鏡。
          G.3.9 水浴箱。
          16.4 G.4 試劑和培養基
          G.4.1  采樣吸收液1-GVPC液體培養基
          G.4.1.1 GVPC添加劑成分:
          多粘菌素B硫酸鹽    10 mg
          萬古霉素    0.5 mg
          放線菌酮    80 mg
          G.4.1.2   BCYE添加劑成分:
          α一酮戊二酸    1.0 g
          N-2酰胺基一2胺基乙烷磺酸(ACES)  10.0 g
          氫氧化鉀    2. 88 g
          L-半胱氨酸鹽酸鹽   0.4 g
          焦磷酸鐵    0. 25 g
           
          G.4.1.3  吸收液成分:
          活性碳    2g
          酵母浸出粉    10 g
          GVPC添加劑    見G.4.1.1
          BCYE添加劑    見G.4.1.2
          蒸餾水    1000 mL
           
          G.4.1.4制法:將活性碳、酵母浸出粉加水至1 000 mL,121℃下高壓滅菌15 min,加入GVPC添加劑(G.4.1.1)和BCYE添加劑(G.4.1.2),分裝于滅菌后的離心管(G.3.3)中備用。
           
          G.4.2  采樣吸收液2-酵母提取液
          G.4.2.1  吸收液成分:
          酵母浸出粉    12 g
          蒸餾水    1 000 mL
           
          G.4.2.2制法:將酵母浸出粉加水至1 000 mL,121℃下高壓滅菌15 min,分裝于滅菌后的離心管(G.3.3)中備用。
          G.4.3  鹽酸氯化鉀溶液[c(HCI·KCI) =0. 01 mol/L]
          G.4.3.1成分:
          鹽酸(0.2 mol/L)    3.9 ml_,
          氯化鉀(0.2 mol/L)    20 mL
          G.4.3.2制法:將上述成分混合,用1mol/L)氫氧化鈉調整pH=2.2±0.2,121℃下高壓滅菌15 min備用。
          G.4.4  其他試劑
          G.4.4.1 GVPC瓊脂平板。
          G.4.4.2   BCYE瓊脂平板。
          G.4.4.3   BCYE-CYE瓊脂平板。
          G.4.4.4 革蘭氏染色液。
          G.4.4.5 馬尿酸鹽生化反應管。
          G.4.4.6 軍團菌分型血清試劑。
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