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          微生物培養基/試劑

          軍團菌PCR試劑盒

          軍團菌PCR檢測試劑盒

           
          【名稱】
          通用名稱:軍團菌PCR檢測試劑盒
          英文名稱: PCR diagnostic kit for Legionella spp.
          【使用方向】
          軍團菌PCR檢測試劑盒是快速準確的定性檢測水中軍團菌數量的試劑盒,PCR 聯合酶聯免疫檢測擴增后樣品的原理,樣品中細菌濃度達10³cfu/ml就可是實現直接檢驗。PCR 過程中,一段特殊的DNA 片段被擴增然后通過和標記生物素的探針雜交來檢測。通過底物酶的培養后,樣品的結果可以通過肉眼判別或者酶標儀來讀取。本試劑盒使用嗜肺軍團菌及軍團屬的特異引物,可與樣本中的嗜肺軍團菌及軍團屬基因組的相應靶位點特異性結合,利用PCR反應達到對嗜肺軍團菌及其他軍團菌快速檢測的目的。試劑盒具有特異性強的特點,可以將嗜肺軍團菌及其他軍團菌從其它細菌中特異地區分出來。
           
          軍團菌PCR檢測試劑盒用于食品、飲用水、臨床樣品以及環境樣品中的嗜肺軍團菌及其他軍團菌的檢測。
          【樣品處理】
          1. 取可疑菌落于高壓滅菌的裝有1ml去離子水的離心管中,12000rpm離心2min,棄上清。
          2. 加入200μl無菌水,充分混勻,12000rpm離心2min,棄上清。
          3. 加入80μl核酸提取液,用移液器吹吸混勻,50℃水浴1小時,100 ℃ 水浴15分鐘,冰上放置10分鐘后12000rpm離心3min。
          4. 取上清液用于PCR檢測。
          【使用方法】
          1. 試劑配制(試劑準備區)
          從軍團菌PCR檢測試劑盒中取出PCR反應液在室溫融化,將PCR反應液充分震蕩混勻,所有試劑在使用前2000rpm離心10s。設所需要的管數n(n=樣本數+1管陽性對照品+1管陰性對照品),每個測試反應體系試劑配置如下表。計算所需要的n管反應的各試劑的使用量,加入至適當體積的無菌離心管中,充分混合均勻,分裝至無菌PCR反應管中,每管20μl。每個反應體系試劑用量:PCR反應液19.7μl ,Taq酶0.3μl
          2.  PCR擴增(擴增和產物分析區)
          將樣本、陰性對照品和陽性對照品使用前恢復至室溫,2000rpm離心10s。向每個
          PCR反應管中分別加入樣本、陰性對照品和陽性對照品各5μl,震蕩混勻,于2000rpm
          離心10s。將PCR管放入PCR儀中,使用以下程序進行擴增反應,整個擴增反應約
          需2小時。
          3.   結果判斷(擴增和產物分析區)
          從PCR管中取出2μl PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。在紫外燈下,陰性對照品沒有任何條帶;軍團菌陽性對照品具有大小為270bp和354bp的兩條帶;其中270bp的條帶為軍團菌屬特異的條帶,而354bp則為嗜肺軍團菌種特異的條帶。當被檢樣品經電泳檢測出現僅出現270bp大小的條帶時則屬于軍團菌(非嗜肺軍團菌)陽性,若出現270bp和354bp的兩條帶則屬于嗜肺軍團菌陽性;當未出現條帶或所出現的條帶大小與陽性對照品的條帶大小不一致時均視為陰性結果。
          【注意事項】
          1.   本試劑盒不做臨床診斷。
          2.   實驗室管理應嚴格按照PCR基因擴增實驗室的管理規范,試驗人員必須進行專業培訓,實驗過程中嚴格分區進行(試劑準備區、樣本制備區、擴增和產物分析區),實驗操作的每個階段使用專用的儀器和設備,各區用品不能交叉使用。
          3.  樣本準備和試劑準備階段應使用生物安全柜,實驗過程中穿工作服,帶一次性手套,使用自卸管移液器。
          4.  對每次實驗進行質量控制。
          5.  試劑使用前要完全解凍,并混合均勻,但應避免反復凍融。
          6.  樣本制備區所用過的吸頭請打入盛有消毒劑的容器,并與廢棄物一起滅菌后方可丟棄。
          7.  實驗完畢用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器。
          8. 所有檢測樣品應視為具有傳染性物質,操作和處理均需符合相關法規要求:衛生部《微生物生物醫學實驗室生物安全通用準則》和《醫療廢物管理條例》。
          【軍團菌PCR檢測試劑盒主要組成部分】
          軍團菌PCR檢測試劑盒 組份 規格 數量 貯存溫度
          核酸提取液 1ml/支 2支 -20℃
          軍團菌 PCR反應液 500μl /支 1支
          Taq酶 12μl /支 1支
          軍團菌陽性對照品 100μl /支 1支
          陰性對照品 100μl /支 1支
           
          【儲藏條件及有效期】    
          -20℃保存,避免反復凍融,有效期一年。
           
           
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