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          技術資料

          海洋水質監測海水檢測培養基

          • 發布時間:2020-09-04
          • 發布者: admin
          • 來源: 本站
          • 閱讀量:1272

          海洋水質監測海水檢測培養基

          海洋水質監測微生物指標包括:弧菌、異養細菌總數、糞大腸桿菌
                 弧菌是海洋中常見菌,近期廣西村民哄搶榴蓮食物中毒事件中的罪魁禍首即是弧菌中的一種--副溶血性弧菌。副溶血性弧菌是一種海洋細菌,主要來源于魚、蝦、蟹、貝類和海藻等海產品。此菌對酸敏感,在普通食醋中5分鐘即可殺死;對熱的抵抗力較弱,56℃加熱5~10min或90℃加熱1min即可將其滅活。海水中常見的致病弧菌還有創傷弧菌,霍亂弧菌等。為避免弧菌引起的食物中毒,日常海鮮需要煮熟食用,蘸醋有助于殺死弧菌。副溶血性弧菌也是養殖業中常見的致病菌,檢測弧菌的TCBS培養基加熱煮沸即可使用,養殖戶的簡易實驗室也可以檢測弧菌。
                 海洋水質監測海水檢測培養基包括檢測弧菌的BTB培養基、TCBS培養基、PCA培養基(含氯化鈉);檢測異養細菌的2216E瓊脂培養基;檢測糞大腸桿菌的乳糖蛋白胨培養液,EC肉湯、M-TEC培養基等。
           
          海水增養殖區監測技術規程
          .4監測項目
          4.4.1水質監測
          —— 必測項目:水溫、透明度、化學需氧量(COD)、pH、溶解氧(DO)、鹽度、無機氮(氨鹽、硝酸鹽、亞硝酸鹽)、活性磷酸鹽、油類、葉綠素-a;
          —— 選測項目:總氮、總磷、汞、鎘、鉛、銅、砷、硅酸鹽、數量、異養細菌總數、浮游植物、揮發酚。
          4.4.2沉積物監測
          —— 必測項目:總汞、鎘、鉛、銅、砷、油類、DDT、多氯聯苯、硫化物、有機質、糞大腸桿菌;
          —— 選測項目:異養細菌總數、總磷、總氮、底棲生物。
          附錄F (規范性附錄) 沉積物糞大腸桿菌—發酵法
          F.1 樣品預處理
          F.2 分離方法
          附錄G (規范性附錄) 沉積物異養細菌總數—平板計數法
          G.1 樣品預處理
          G.2 分離方法
          糞大腸桿菌/發酵法--GB17387.7
          弧菌數量/平板計數法/參見附錄A
          異養細菌總數/平板計數法/GB17387.7
          附錄A(規范性附錄)
          弧菌數量—平板計數法
          A.1培養基
          —— 計數培養基BTB:牛肉膏3.0g, 蛋白胨10.0g,蔗糖15.0g,氯化鈉20.0g,Teepol 1.0g,
          溴麝香草酚藍0.06mg,蒸餾水1000mL。配制方法:將上述數量的牛肉膏、蛋白胨、蔗糖、氯化鈉和Teepol加熱溶解于1000mL蒸餾水中,
          用16%的氫氧化鈉調整pH為7.8,再將溴麝香草酚藍按上述量溶解其中。分裝于試管(每管5mL)中,塞棉塞,包裝后于115℃高壓蒸氣滅菌20min,
          然后于冰箱中冷藏備用。
          —— 平板分離培養基TCBS:蛋白胨10.0g, 酵母膏5.0g,檸檬酸鈉10.0g,硫代硫酸鈉10.0g, 蔗糖20.0g,膽鹽8.0g,
          氯化鈉10.0g,檸檬酸鐵1.0g,
          溴麝香草酚藍0.04g,麝香草酚藍0.04g,瓊脂15g,蒸餾水1000mL。配制方法:將上述數量的蛋白胨、酵母膏、檸檬酸鈉、硫代硫酸鈉、蔗糖、膽鹽、氯化鈉、檸檬酸鐵、溴麝香草酚藍和麝香草酚藍加熱溶解于1000mL蒸餾水中,調節pH為8.6,在加熱至沸騰。然后冷卻至55℃,
          傾注無菌培養皿即可。該培養基不需要高壓滅菌。
          —— PAC斜面培養基(比食品微生物PCA多氯化鈉成分):蛋白棟5.0g,酵母膏2.5g, 葡萄糖1.0g,氯化鈉10.0g,
          瓊脂15.0g,蒸餾水1000mL。配制方法:將上述量蛋白棟、酵母膏、葡萄糖、氯化鈉和瓊脂加熱溶解于1000mL蒸餾水中,
          調節pH為7.0,分裝于試管(每管5mL)中,
          塞棉塞,包裝后于高壓蒸汽滅菌鍋中115℃滅菌20min。滅菌后立即取出裝有上述培養基的試管,傾斜放置于實驗臺面上,使其冷卻后培養基在試管內形成斜面。放置冰箱中冷藏備用。
          A.2檢測步驟
          —— 弧菌的分離和計數:采用9管“MPN”法以3個不同稀釋度(原水樣、10-1和10-2)的水樣接種于BTB培養液的試管中, 37℃培養18h,
          把陽性管中的菌液于TCBS平板上劃線分離, 平板放進培養箱里,
          于37℃培養18h,將出現的綠色、藍綠色和黃色菌種接種于PCA斜面上保存。分離菌株首先經革蘭氏染色、氧化酶、運動性和0/129弧菌素敏感實驗等,符合弧菌特征的菌株,視其來源的“MPN”管數,
          查“MPN”表進行計數。
          —— 弧菌種的鑒定:從TCBS平板上分離的菌株經上述4個弧菌屬基本特征鑒別后,采用API20E系統進行生理生化特征鑒定,
          并做耐鹽性試驗(鹽度為0、3%、6%、8%和10%), 根據API20E反應結果, 查API20E檢索表, 即可得到種名 。
          注: 除有特殊需要外,注: 可不注: 做第二步。
           
          海洋生態環境監測技術規程
          附錄B (規范性附錄) 生物體內細菌學指標檢測技術
          (規范性附錄)
          生物體內細菌學指標檢測技術
          B.1儀器設備
          —— 恒溫培養箱:25℃-44℃;
          ——干熱滅菌箱;
          —— 高壓蒸氣滅菌器;
          —— 接種環;
          —— 培養皿:直徑9cm;
          —— 試管:12x150mm;
          —— 吸量管:1,10ml;
          —— 發酵管:5x30mm;
          —— 玻璃刮棒:接種用;
          —— 紗布和棉花:塞試管用;
          —— 錐形燒瓶;
          —— 牛皮紙;
          —— 電爐:2000W;
          —— 超凈工作臺;
          —— 一般實驗常用儀器設備;
          —— 無菌研缽
          B.2采樣方法
          進行細菌學指標檢測分析的樣品需要無菌采集,并且需要盡快進行實驗室檢測分析,不可長時間保藏?,F場采集的生物樣品須在冷藏條件下于6小時內送回實驗室進行分析。
          現場生物樣品采集系用一次性消毒手套采取活生物于無菌朔料袋中,做好標記、及時裝入便攜式冷藏箱中。
          B.3測試分析方法
          B.3.1測試分析方法-發酵法
          B.3.1.1方法原理
          大腸菌群系一群在37℃或44℃生長時能使乳糖發酵、在24h內產酸產氣的需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。大腸菌群數系指單位生物樣中所含有的“大腸菌群”的數目。一般在37℃培養生長的稱為“總大腸菌群”,在44℃培養生長的稱為“糞大腸菌群”。海洋生物檢驗采用44℃培養法,以檢出糞大腸菌群。
          發酵法系通過初發酵及復發酵二個步驟,以證實生物體中是否存在糞大腸菌群并測定其數目。
          B.3.1.2試劑及培養基配制
          a) 試劑配制
          1) 溴甲酚紫乙醇溶液
          稱取1.6g的溴甲酚紫[C6H4SO2OC(C6H2CH3OHBr)2]溶于2-3mL乙醇(C2H5OH)中,然后用蒸餾水定容到100mL。
          2) 碳酸鈉溶液
          稱取10.6g碳酸鈉(NaCO3)溶于蒸餾水,并定容到100mL。
          b) 乳糖蛋白胨培養基的配制
          1)培養液成份
          蛋白胨10.0g
          牛肉膏3.0g
          乳糖5.0g
          氯化鈉5.0g
          溴甲酚紫乙醇溶液(b)-1))1mL
          蒸餾水
           
          廈門敏測實驗器材有限公司供應以上BTB培養基、TCBS培養基、PCA培養基(含氯化鈉)、2216E瓊脂培養基、 乳糖蛋白胨培養液、EC肉湯、M-TEC培養基等海洋水質監測海水檢測培養基。
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